Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

1. SpecimenoKolekto:Specimeno devas esti kolektita en sterilajn tubojn konforme

kun normaj teknikaj specifoj.

2. Preparado de Reaktiva (Areo de Preparado de Reaktiva)

Elprenu la komponantojn de la ilaro, balancu ilin ĉe ĉambra temperaturo por standby uzo.

3. Specimena Pretigo (Specimena Pretigo-Areo)

3.1 Ekstraktado de nuklea acido

Oni rekomendas preni 200μL likvajn specimenojn, Pozitivan Kontrolon kaj Negativan Kontrolon por eltiro de nuklea acido, laŭ la respondaj postuloj kaj proceduroj de virusaj DNA-ekstraktadoj.

3.2 Solvo de liofiligita pulvoro kaj aldono de ŝablonoj

Preparu Monkeypox Virus Lyophilized premix laŭ la nombro da specimenoj.Unu specimeno bezonas unu PCR-tubon enhavantan Liofiligitan premiksan pulvoron.Negativa kontrolo kaj pozitiva kontrolo devas esti traktataj kiel du specimenoj.

(1) Aldonu 15μL-Dissolvan Solvon en ĉiun PCR-tubon enhavantan Liofiligitan premikson, tiam aldonu 5μL eltiritajn specimenojn/Negativan Kontrolon/Pozitivan Kontrolon en ĉiun PCR-tubon respektive.

(2) Ferme kovru PCR-tubojn, movu PCR-tubojn mane ĝis liofiligita pulvoro estas tute solvita kaj miksita, kolektu la likvaĵon al la fundo de PCR-tuboj per tuja malaltrapida centrifugado.

(3) Se uzu komunan Realtempan PCR-instrumenton por detekto, tiam rekte translokigu PCR-tubojn al la plifortiga areo;se vi uzas BTK-8 por detekto, tiam necesas fari la jenajn operaciojn: translokigi 10 μL-likvaĵon de PCR-tubo al la reakcia blato puto de BTK-8.Unu PCR-tubo respondas al unu puto sur la blato.Dum pipeta operacio, certigu, ke la pipeto estas 90 gradoj vertikala.La aerosolbaraj pipetpintoj devas esti metitaj en la centron de la puto kun modera forto kaj ĉesu puŝi la pipeton kiam ĝi atingas la unuan ilaron (por eviti vezikojn).Post kiam la putoj estas plenigitaj, elprenu reakcian blaton membranon por kovri ĉiujn putojn kaj la blato tiam estas translokigita al la plifortiga detekta areo.

4. PCR-Pliforto (Detekta Areo)

4.1 Metu la PCR-tubojn/reagan blaton en la reaktan tankon kaj starigu la nomojn de ĉiu reago bone en la responda ordo.

4.2 Agordoj de detekta fluoreskeco: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Interna Kontrolo (CY5).

4.3 Rulu la sekvan biciklan protokolon

Protokolo de ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Protokolo de BTK-8:

5. Analizo de rezultoj (bonvolu konsulti Manlibron pri Instrumento)

Post la reago, la rezultoj estos konservitaj aŭtomate.Alklaku "Analizi" por analizi, kaj la instrumento aŭtomate interpretos Ct-valorojn de ĉiu specimeno en rezulta kolumno.La negativaj kaj pozitivaj kontrolaj rezultoj konformas al la sekva "6. Kvalita Kontrolo".

6. Kontrolo de kvalito

6.1 Negativa Kontrolo: Neniu Ct aŭ Ct>40 en FAM-kanalo, Ct≤40 en CY5-kanalo kun normala plifortiga kurbo.

6.2 Pozitiva Kontrolo: Ct≤35 en FAM-kanalo kun normala plifortiga kurbo, Ct≤40 en CY5-kanalo kun normala plifortiga kurbo.

6.3 La rezulto validas se ĉiuj ĉi-supraj kriterioj estas plenumitaj.Alie, la rezulto estas malvalida.

Rezulta Interpreto

La sekvaj rezultoj eblas:

NOTO: Se nevalida rezulto okazas, la specimeno devas esti kolektita kaj testita denove.